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叮！您有一份色譜柱維修報告，請注意查收！
叮！您有一份色譜柱維修報告，請注意查收！
2022-08-25
當您的色譜柱出現(xiàn)異常，您知道其中的原因和預防方案嗎？
今天小編就為您帶來一份色譜柱的維修報告，讓我們一起來看看反相液相色譜柱的常見污染現(xiàn)象，查找其中的原由，并學習多種可行的預防方案。
01 填料污染
異常表現(xiàn)：
柱壓變高，柱效變低，出峰峰形異常等。
原因分析：
1、中藥類樣品成分復雜，如前處理方式不當，則容易引起強保留成分積留在色譜柱入口端，導致色譜柱壓力升高，柱效下降，峰形異常，或在色譜圖中出現(xiàn)“鬼峰”。
2、蛋白類樣品積累：生物類樣品易在柱頭累積，導致柱壓升高，柱效下降。
3、其他：如膠狀、絮狀等樣品通過過濾無法去除，也會積壓在篩板和柱頭端，引起柱壓升高。
4、流動相一次配置使用超過12小時變質，生成的絮狀物導致色譜柱的污染。
預防方案：
1、中藥等成分復雜的樣品：開發(fā)合適的前處理方法，采用SPE小柱、萃取等方法，減少樣品溶液中的易污染成分。
2、蛋白類樣品的積累：定期進行色譜柱的沖洗維護，推薦使用乙腈-水-三氟乙酸（50:50:0.1）作為洗脫試劑，低流速過夜沖洗。
3、其他：如膠狀、絮狀等樣品無法通過過濾去除，從而污染柱篩板和柱頭的情況，建議更好在樣品處理或方法工藝上去優(yōu)化解決。
4、使用保護柱，且在保護柱能力下降后，要及時地更換新的保護柱芯。柱壓升高>10%；柱效下降>10%；分離度下降>10%，均是需要更換保護柱芯的信號。
5、對于檢測復雜樣品的色譜柱，建議定期按色譜柱說明書的異常再生方法進行色譜柱的再生維護，目的是定期去除柱頭的強保留污染物質。
6、12小時更長不超過24小時更換流動相以及儲液瓶。
02 填料板結
異常表現(xiàn)：
1、柱壓升高，柱效低，峰形拖尾或前延等現(xiàn)象。
2、色譜柱填料板結，打開色譜柱后，會發(fā)現(xiàn)，填料顏色不變，但填料成片狀、塊狀、結晶等結塊現(xiàn)象。
原因分析：
1、流動相配置時間過長，流動相長菌，或乙腈等有機相長時間放置產(chǎn)生絮狀沉淀。
2、如上述填料污染的原因中，樣品成分復雜，容易被柱頭端填料吸附，特別如樣品中含有蛋白類物質，在柱頭端填料進行富集，則易導致填料污染板結。
3、其他：如膠狀、絮狀等樣品通過過濾無法去除，樣品進入色譜柱后積壓在篩板和柱頭端。
預防方案：
1、流動相按需配置，純水流動相一次配置使用不超過24小時，其他含有有機相流動相一次使用不超過3天。
2、檢測復雜樣品的色譜柱污染預防方案，可參見上文一中的填料污染預防。
03 填料塌陷
異常表現(xiàn)：
一般會出現(xiàn)柱壓高，柱效低，峰形拖尾或前延，出峰漂移等。此類損傷的色譜柱，異常再生或維修一般無法改善。
原因分析：
1、除了特殊說明，硅膠基質的色譜柱的長期使用pH范圍是2-8，流動相或樣品溶液的pH較高或較低，均會加快鍵合相的脫落和硅膠的破碎。
2、柱溫較高，加快了緩沖鹽對硅膠基質的攻擊，導致鍵合相脫落和填料塌陷。
3、小基團鍵合相，本身的性質較易脫落，是屬于正常的填料性質表現(xiàn)的現(xiàn)象。
4、長期在高壓條件下使用色譜柱等。
預防方案：
填料塌陷有兩種填料異常的形式：鍵合相脫落和基質破碎。
● 避免鍵合相脫落
1、樣品溶液和流動相的pH控制在長期適宜的使用范圍內(nèi)，樣品溶液pH異常，使用保護柱，或者更換月旭LP（耐受pH≤2）系列或Xtimate 系列（耐受pH≥8）。
2、根據(jù)色譜柱的鍵合相性質，選擇合適的試劑作為流動相。如非極性鍵合相，避免使用非極性溶劑；中級性鍵合相，避免使用中等極性溶劑；極性鍵合相，避免使用極性溶劑。
3、參考月旭液相色譜柱說明書中的存儲條件。
● 避免基質破碎
1、除特殊說明，硅膠基質色譜柱使用的流動相和樣品溶液pH不超過8。
2、按照色譜柱說明書，選擇適宜的柱溫，避免高溫。
3、避免壓力脈沖，高壓等。
需要注意，月旭的反相液相色譜柱一般建議正向使用，反接沖洗。但對于已經(jīng)存在填料塌陷的色譜柱，不建議反接沖洗色譜柱，以免對色譜柱造成進一步的損傷。
04 篩板堵塞
異常表現(xiàn)：
一般會出現(xiàn)柱壓高，柱效低，峰形拖尾等。
原因分析：
1、使用的過濾膜材質不對或質量不好，引入了新的物質到流動相或樣品中，導致篩板和填料污染。
2、儀器系統(tǒng)長時間未經(jīng)過徹底清洗。
3、流動相中的緩沖鹽和離子對試劑使用前后沒有過渡和有效的沖洗，析出，堵塞篩板和填料。
4、在梯度使用的過程中，有機相比例高于60%，變換速率過快，有緩沖鹽析出。
5、不當?shù)倪\輸引起的顆粒物脫落等堵塞篩板。
預防方案：
1、更換更加耐受、質量更好的過濾器材（請參考月旭微信公眾號中關于過濾材質選擇的文章）。
2、泵后清洗溶劑和洗針溶劑定期更換，建議一周更換一次，儀器系統(tǒng)定期使用40度溫水，有機溶劑等徹底清洗。
3、色譜柱使用前后用過渡流動相過渡掉系統(tǒng)中高有機溶劑或者高鹽相（參考月旭液相色譜柱說明書中新柱活化項下方法）。
4、減緩流動相的變化速率，降低更高有機相的比例。
5、新柱子嚴格按照說明書活化后使用，如活化時發(fā)現(xiàn)壓力偏高，說明運輸及保存過程中色譜柱保存溶液有損失，此時宜選用低流速過夜的方式活化色譜柱。如低流速過夜活化色譜柱后，壓力依然偏高，則可能是不當運輸引起了篩板堵塞，需要聯(lián)系廠家寄回維修排查。
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