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解鎖ADC藥物質(zhì)控密碼!月旭HIC色譜柱閃耀登場

2025-04-02

生物大分子藥物近年來發(fā)展迅猛,特別是以抗體藥物偶聯(lián)物(Antibody drug conjugate,生物分子藥物近年來發(fā)展迅猛,特別是以抗體藥物偶聯(lián)物(Antibody drug conjugate,ADC)為代表的新型藥物正以驚人的速度崛起,成為腫瘤治療領(lǐng)域中一顆璀璨的新星。ADC是通過連接子將抗體與細胞毒性載藥偶聯(lián)而成的藥物分子。

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精妙絕倫的設(shè)計,使ADC兼具抗體藥物精準靶向性和小分子細胞毒性藥物高效殺傷的雙重優(yōu)勢,猶如一枚精準制導(dǎo)的 “生物導(dǎo)彈”,在腫瘤的靶向治療中發(fā)揮著重要作用。截止目前,全球已有17款A(yù)DC藥物被批準上市。其中,僅2024年就有83種新的ADC首次進入臨床。據(jù)不完全統(tǒng)計,全球ADC藥物市場規(guī)模已超過130億美元。

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ADC作為生物治療藥物本身結(jié)構(gòu)復(fù)雜,且具有高度非均一性的特點,給其質(zhì)控增加了難度,對分析檢測方法提出了更加嚴苛的要求。其中,藥物抗體比(Drug-to-antibody ratio, DAR)不僅直接反映靶向腫瘤細胞的載荷數(shù)量,同時影響ADC藥物的治療效果和安全性。因此,在ADC開發(fā)過程和商業(yè)化生產(chǎn)運營中,作為關(guān)鍵質(zhì)量屬性之一的DAR的測定和監(jiān)測尤為重要。

疏水色譜(Hydrophobic Interaction Chromatography,HIC)是一種利用分析樣品的疏水性差異進行分離的色譜模式,常用于ADC藥物的DAR評估。

為此,我們月旭科技推出了一款基于疏水作用機理的高性能蛋白分離色譜柱Advanchrom HIC-Butyl,它采用先進的大孔硅膠微球為基質(zhì),結(jié)合獨特的表面鍵合技術(shù),適用于抗體以及ADC的分離表征。

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01 產(chǎn)品特點

● 獨特的化學(xué)設(shè)計,對抗體偶聯(lián)藥物分子(ADC)具有良好的選擇性

● 超高純大孔硅膠微球基質(zhì),柱效高

● 非特異性吸附低,回收率高

● 耐壓及耐受性好

● 批次間一致性佳

● 使用較低的鹽組分即可獲得樣品良好的保留與分離

02 產(chǎn)品信息

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03 案例分析

應(yīng)用案例1:雙抗ADC的DAR分析

色譜條件:

色譜柱:Advanchrom HIC-Butyl

規(guī)格:3 μm, 4.6 × 50 mm

流動相:

A)100 mM磷酸鈉緩沖溶液+1.0 M硫酸銨, pH 7.0

B)100 mM磷酸鈉緩沖溶液, pH 7.0/異丙醇=80/20

洗脫程序:

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流速:0.5 mL/min

檢測波長:280 nm

柱溫:25 ℃

進樣量:10 μL

樣品:ADC

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圖1 雙抗ADC樣品不同DAR分布

結(jié)論:在硫酸銨體系下,具有不同DAR的ADC分子可在HIC柱上實現(xiàn)良好的保留與高效的分離。其中裸抗疏水性最弱,優(yōu)先被洗脫,偶聯(lián)小分子藥物數(shù)量越多的分子,其疏水性就越強,越晚洗脫。

雖然使用硫酸銨體系作為流動相在DAR的測定中有廣泛的應(yīng)用,但由于其作為非揮發(fā)性鹽,不能實現(xiàn)與MS的兼容。為此我們在也嘗試了乙酸銨(揮發(fā)性鹽)體系,在HIC柱上獲得單抗ADC藥物DAR2峰(如圖2)與利妥昔單抗峰(如圖3)的良好保留與優(yōu)異峰形,為后續(xù)DAR的MS鑒定提供可兼容的流動相體系。

應(yīng)用案例2:單抗ADC的DAR2測定

色譜條件:

色譜柱:Advanchrom HIC-Butyl

規(guī)格:3 μm, 4.6 × 50 mm

流動相:

A)1.0 M乙酸銨

B)25 mM乙酸銨/乙腈=70/30

洗脫程序:

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流速:0.5 mL/min

檢測波長:280 nm

柱溫:30 ℃

進樣量:10 μL

樣品:ADC

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圖2 單抗偶聯(lián)ADC樣品DAR2

應(yīng)用案例3:完整抗體(利妥昔單抗)的測定

色譜條件同案例2

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圖3 利妥昔單抗樣品

應(yīng)用案例4:標準蛋白的分離

色譜條件:

色譜柱:Advanchrom HIC-Butyl

規(guī)格:3 μm, 4.6 × 50 mm;3 μm, 4.6 × 35 mm

流動相:

A)100 mM磷酸鈉緩沖溶液+2.0 M硫酸銨, pH 7.0

B)100 mM磷酸鈉緩沖溶液, pH 7.0/乙腈=90/10

洗脫程序:

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流速:1.0 mL/min

檢測波長:280 nm

柱溫:30 ℃

進樣量:10 μL

樣品:(~1 mg/mL溶于流動相A中)

1. 核糖核酸酶A  2. 溶菌酶  3. α-胰凝乳蛋白酶原

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圖4 標準蛋白的分離(對比市售HIC柱)

結(jié)論:月旭科技的兩款HIC柱均可實現(xiàn)三種標準蛋白的良好保留與分離,且峰形與塔板數(shù)均優(yōu)于某競品柱。

04 流動相推薦

● 在HIC-UV下,硫酸銨與乙酸銨體系均可嘗試以獲得更為滿意的實驗結(jié)果。

● HIC-MS下,使用乙酸銨體系。

05 質(zhì)量保證

每一根出廠的HIC-Butyl色譜柱都經(jīng)過成熟的裝柱工藝和嚴格的質(zhì)量管理體系生產(chǎn),以確保良好的分離性能。

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06 訂貨信息

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